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小细胞肺癌（SCLC）约占所有肺癌的10～15%，且恶性程度高、转移扩散较早，大多数SCLC患者确诊时已有转移(1)。SCLC患者初期对铂类化疗药很敏感，但也较易泛起耐药，固然一部分患者能够受益于化疗和免疫疗法的“联袂抗敌”，但且生存期超过1～2年的患者极少(2)，仍需寻找指导临床决议计划的生物标志物(3)。

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近年来研究根据不同主要转录因子的表达将SCLC分为四个亚型，不同亚型呈转录组学差异性表现，且跟着治疗泛起动态变化(4, 5)。然而，上述的转录亚型与患者预后相关性尚不清晰。为解决这个题目，科研人员们将目光瞄向了近年火热的液体活检，而在SCLC发展过程中作用重要的DNA甲基化就可以成为目标(6)。

近日，来自英国曼彻斯特大学的Caroline Dive、Dominic G. Rothwell和来自美国纪念斯隆-凯特琳癌症中央的Charles M. Rudin带领的团队，就研发了一套无创性、敏捷且应用范围广泛的检测全基因组DNA甲基化的流程，通过检测患者外周血游离DNA（cfDNA）甲基化情况，指导SCLC分期、分型鉴定以及疾病监控，研究发表在了Nature Cancer上。

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那么，这项有望进行临床转化的技术手段是怎么来的，又将如何应用呢？

研究职员首先在二代测序（NGS）的基础上，构建了T7-MBD-seq测序方法。利用此方法对97例SCLC患者来源肿瘤组织异体移植组织（PDX）或轮回肿瘤细胞来源移植组织（CDX）和13例健康肺组织进行测序。

测序结果显示，CDX/PDX和健康肺组织的甲基化模式存在显著的不同，且这一方法所测结果与利用Illumina平台对原发肿瘤和健康肺组织测序结果相一致，提示了T7-MBD-seq测序方法的可靠性（图1）。

图1. T7-MBD-seq与Illumina平台对不同SCLC肿瘤组织和正常肺组织甲基化测序结果一致

研究职员进一步利用此方法，对78例SCLC患者和79例非肿瘤来源的cfDNA进行测序。结果发现，此方法可对1.83-34.4 ng的cfDNA进行测序，且甲基化富集分数与50 ng CDX/PDX样本相近（图2左）。同时，统一患者来源CDX和cfDNA的测序结果也显示，甲基化模式高度一致（图2右）。以上结果提示，应用T7-MBD-seq测序方法检测cfDNA甲基化，并将其作为SCLC患者的诊断标志物，具有可靠的发展前景。

图5. cfDNA甲基化分数低的患者，则总生存期长

考虑到SCLC分子分型对SCLC患者的治疗、预后具有重要意义，研究职员又对模型进行了一系列练习，并检测了cfDNA甲基化与分型的相关性。结果显示，根据相应的cfDNA甲基化检测情况，有助于正确区分患者属于ASCL1、NEUROD1型仍是双阴性分型（图6）。